Droplet digital PCR göstərir ki, transgen nüsxə sayı SOD1G93A ALS siçanlarında ömrü müəyyən edir

Amyotrofik lateral skleroz (ALS) əzələ zəifliyi və nəticədə paralizə ilə nəticələnən dağıdıcı bir nörodegenerativ xəstəlikdir. Klinikdən əvvəlki ALS modelləri xəstəlik inkişafının mexanizmlərini anlamaq və müalicə namizədlərini yoxlamaq üçün faydalı bir vasitədir. ALS hallarının təxminən 20%-i genetik komponentə malikdir və onlardan təxminən 20%-i superoksid dismutase 1 (SOD1) genində mutasiyalara aiddir. ALS-də müxtəlif mutasiyaları öyrənmək üçün bir neçə siçan modeli yaradılıb, lakin ən məşhur və yaxşı xarakterizə olunan transgenik SOD1G93A siçan modelidir. Bu modeldə mutasiya edilmiş insan SOD1 (hSOD1) geninin nüsxələri siçan genomuna daxil edilir və nüsxələr sayı xəstəliyin ağırlığına uyğun gəlir. Düzgün və təkrarlana bilən məlumatlar əldə etmək üçün heyvanların bir araşdırmaya daxil edilmədən əvvəl nömrələrinin yoxlanılması tövsiyə olunur. Bununla birlikdə, SOD1G93A nömrəsini test etmək üçün geniş qəbul edilmiş standartlaşdırılmış protokol yoxdur və hSOD1 siçanlara yerləşdirilməsinin mütləq nömrəsi heç vaxt miqdarlaşdırılmamışdır. Burada biz SOD1G93A heyvanlarının (JAX soy: 004435) bir kohortundan DNA-nı təcrid etdik və transgen kopiyasi nömrənin mütləq miqdarlandırılması üçün bir metodunu damla rəqəmsal PCR (ddPCR) vasitəsilə təsdiq etdik. Biz həm ddPCR-nin, həm də hazırkı standartın, qPCR-nin etibarlı olaraq qönotyp müəyyənləşdirildiyini gördük. Biz ddPCR nömrəsinin xəstəlik fenotipi və inkişafı ilə əhəmiyyətli dərəcədə əlaqəli olduğunu göstərdik və ddPCR-ni real vaxt PCR ilə müqayisə edərək, ddPCR-ni SOD1G93A nömrəsinin ölçülməsinin daha dəqiq və etibarlı bir yolu olduğunu müəyyən etdik.

Bu təcrübələrlə bağlı heyvançılıq sahəsində verdiyi töhfələrə görə Hillary Hoyt-a təşəkkür edirik. Grafiklər BioRender.com ilə yaradılıb.

Bu tədqiqat ABŞ Müdafiə Nazirliyi tərəfindən dəstəklənmişdir: DOD GRANT13938213.

Neyrologiya kafedrası, Massachusetts Universitetinin Chan Tibb Məktəbi, Worcester, MA, 01605, ABŞ

Genetik və Hüceyrə Tibb Bölməsi, Massaçusets Universitetinin Chan Tibb Məktəbi, Worcester, MA, 01605, ABŞ

Ashley L. Harkins, Sukanya Iyer, Maria Predtechenskaya, Meghan Blackwood & Allison M. Keeler